一、什么是电穿孔仪？原理与用途

1）核心原理：瞬时电场打孔，分子进入细胞

电穿孔仪会在极短时间内（微秒到毫秒级）对样本施加脉冲电压。细胞膜在电场作用下产生短暂微孔，外源物质在电场驱动或扩散作用下进入细胞内。电场撤去后，细胞膜在一定条件下能恢复，细胞继续存活并表达外源基因或完成编辑。

2）电穿孔主要用于什么实验？

常见应用包括：

• 细菌电转：质粒导入大肠杆菌、沙门氏菌、乳酸菌等

• 真菌/酵母电转（部分体系）

• 哺乳动物细胞电转：悬浮细胞、贴壁细胞、难转染细胞

• 原代细胞电转：T细胞、B细胞、NK细胞、干细胞等

• CRISPR 基因编辑：Cas9/sgRNA 复合物或质粒导入

• RNA/siRNA 转染：瞬时敲低、mRNA表达

• 蛋白/染料导入：细胞追踪、功能研究

3）电穿孔的核心优势

• 通用：细菌、酵母、哺乳动物细胞都可用（不同参数/耗材）

• 快：一次脉冲即可完成导入

• 适合难转染体系：化学法不好用的细胞往往电转更有效

• 试剂依赖低：不需要大量转染试剂，重复性更好

• 可做大质粒：相对更容易导入大质粒或复杂构建

二、电转细菌怎么做？（电细菌/电转化详细流程）

电转细菌最常见的对象是电感受态大肠杆菌（Electrocompetent E. coli）。成功率高低主要取决于：细胞电感受态质量、盐离子残留、质粒纯度、电击参数、恢复条件。

A. 电转细菌的关键原理与注意点

1）盐离子必须极低
电击时溶液盐离子高会导致“打火（arcing）”，样本直接失败。
因此电感受态制作要反复冰冷低盐洗涤（常用10%甘油），质粒也不能带盐或乙醇残留。

2）全程低温
电感受态细菌必须在冰上操作，电转杯也要预冷，避免细胞活性下降。

3）电击后要立刻加入复苏液
电击后微孔需要在温和条件下恢复，需立即加入SOC/LB复苏，并进行适当时间的无抗培养。

B. 电转细菌标准操作步骤（以E. coli为例）

准备材料：

• 电感受态细菌（冻存，-80℃）

• 质粒DNA（高纯度，尽量去盐）

• 预冷电转杯（常见0.1 cm或0.2 cm间隙）

• SOC或LB培养基（室温或37℃预温）

• 抗性平板（提前预热到室温或37℃回温）

• 电穿孔仪

步骤：

1. 取出电感受态细菌，冰上快速融化（一般5–10分钟），全程保持冰冷。

2. 加入质粒DNA（一般1–2 µL即可，建议10–100 ng范围；高浓度、含盐会打火），轻轻混匀，避免剧烈吹打。

3. 将混合液加入预冷电转杯，轻敲消除气泡（气泡会导致打火）。

4. 擦干电转杯外壁水分，放入电穿孔仪电击。

5. 电击完成后立刻加入SOC/LB（通常500–1000 µL），吹打混匀转入无菌离心管。

6. 37℃、200 rpm复苏（常见45–60分钟；具体看抗性标记）。

7. 涂布含抗生素平板，倒置培养过夜（37℃）。

C. 电转细菌常用电击参数（入门参考）

不同仪器与电转杯规格会影响参数。以下是常见经验范围（仅作起点，最终以仪器推荐参数和菌株优化为准）：

• 0.1 cm杯：常用电压约 1.2–1.8 kV

• 0.2 cm杯：常用电压约 2.0–2.5 kV
  时间常见在几毫秒级；如果出现打火或时间明显过短，多数是盐离子过高或有气泡。

D. 失败排查（电细菌常见问题）

1）打火（arcing）
原因：盐离子高、DNA带盐、杯壁潮湿、有气泡。
解决：更换高纯DNA、减少体积、重新制作电感受态、杯体擦干、避免气泡。

2）无菌落
原因：DNA量太低、细胞感受态差、抗性平板不对、复苏不足、参数过强导致细胞死亡。
解决：提高感受态质量、延长复苏、降低电压或换杯规格、确认抗性与平板有效。

3）菌落很少且背景高
原因：平板抗生素失效或浓度不对。
解决：更换新抗生素、重配平板。

三、电转细胞怎么做？（哺乳动物细胞电穿孔流程）

哺乳动物细胞电转比细菌更“娇气”，成功的关键是：细胞状态、缓冲液体系、电击参数、细胞密度与电转后护理。

A. 电转细胞的适用场景

• 难转染细胞系（如部分血液肿瘤细胞、神经细胞等）

• 悬浮细胞（如Jurkat、THP-1等）

• 原代免疫细胞（T细胞、NK细胞）

• CRISPR编辑（RNP/质粒）

• mRNA/siRNA导入（需要高效率且快速表达）

B. 电转细胞通用操作步骤（适用于多数体系的“框架流程”）

准备材料：

• 对数生长期、状态良好的细胞

• 电转缓冲液（专用或低离子体系）

• 待转染物：质粒DNA、mRNA、siRNA、CRISPR RNP等

• 电转杯或电转专用耗材

• 预温完全培养基（含血清）

• 电穿孔仪

步骤：

1. 前一天或数小时前确保细胞处于对数生长期，细胞活力高，贴壁细胞避免过度融合。

2. 收集细胞：贴壁细胞轻柔消化；悬浮细胞离心收集。

3. 用无血清或专用电转缓冲液重悬细胞，控制细胞密度（常见在10^6数量级/反应，具体按细胞类型与耗材推荐）。

4. 加入待转染物，轻轻混匀，避免气泡。

5. 加入电转杯或电转管，保证液体覆盖电极并无气泡。

6. 电击后立即加入预温完全培养基（含血清），轻柔混匀并转移到培养板/瓶中。

7. 放入CO₂培养箱培养，电转后通常24–48小时观察表达或进行筛选。

C. 电转细胞的关键点（比参数更重要）

1）细胞状态决定一半成功率
电转前细胞必须健康：活率高、污染为零、传代不要太密或太稀。原代细胞尤为重要。

2）缓冲液必须低离子且配套
电转缓冲液离子强度高会导致放电异常并伤细胞。不要用普通PBS替代电转缓冲液。

3）电转后“护理”很关键
电转会造成短暂应激，建议：

• 电转后及时补充含血清培养基

• 贴壁细胞可在涂层板（如Poly-L-lysine、Matrigel等）提高贴壁

• 必要时使用ROCK inhibitor等细胞保护策略（取决于细胞类型）

D. 电转细胞常见失败原因与排查

1）细胞死很多
原因：电压过高/脉冲过强、缓冲液不对、细胞状态差、气泡、温度不合适。
解决：降低强度、换缓冲液、优化细胞密度、确保无气泡、使用新鲜健康细胞。

2）活得好但表达很低
原因：DNA质量差、量太低、细胞类型难表达、参数过弱或时机不对。
解决：提高DNA纯度与用量（不过量）、优化参数、尝试mRNA或RNP方案、调整培养时间。

3）重复性差
原因：细胞批次差、密度不一致、缓冲体系变化、操作时间差异大。
解决：固定细胞代数与密度，统一操作节奏，做参数矩阵优化。

四、如何把品牌与售后卖点写成专业介绍（可直接用于产品页/招采材料）

你希望强调的品牌信息是：

• 品牌：长沙实了个验仪器制造有限公司出品

• 售后：质保3年，只换不修

你可以这样写，既专业又有购买理由：

长沙实了个验仪器制造有限公司出品电穿孔仪通过可控脉冲电场实现细菌与细胞的高效电穿孔转染，适用于质粒、RNA/siRNA、蛋白及CRISPR体系导入，覆盖细菌电转、哺乳动物细胞电转及原代细胞应用需求。设备支持参数可调与程序化设置，便于不同细胞类型与实验体系优化。
售后方面提供3年质保，执行只换不修服务政策，可显著降低停机风险，保障实验连续性，尤其适合对仪器稳定性、项目周期与交付要求较高的科研与检测单位。

五、给用户的“最简操作口诀”（方便新手记忆）

1）电转细菌：低盐、冰上、无气泡、电击后立刻复苏。
2）电转细胞：细胞要健康、缓冲要对、电击后护理要到位。
3）任何体系：先用推荐参数跑通，再做参数矩阵优化。